蛋白純化儀校準

蛋白純化儀校準，為了保證分析結果的準確，有必要對蛋白質純化分析儀的性能進行校準和質量控制。由于是蛋白質純化分析是近年來興起的新新領域，目前國內外還有沒針對蛋白質純化分析儀儀器的相關標準，只有針對于藥物生產中對儀器自帶分析軟件的相關標準要求（如 FDA 的 21-CFR-part11）。國內也尚未出臺有關蛋白質純化分析儀的檢定規程或校準規范。隨著蛋白質純化分析儀的需求和數量隨著生物制藥的興起成指數級增長，對于儀器性能的要求也越來越高，如何確保其結果的準確性和溯源性，從而確保產品質量的問題日益凸顯。因此，對蛋白質純化儀校準特性指標及其校準方法進行研究，并整理形成相關技術規范，對儀器性能進行校準和質量控制是十分必要和急迫的；

蛋白質純化分析儀主要的純化和分離原理包括凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、反相層析和親和層析。分析儀的工作流程主要包括待測樣品通過進樣系統，由輸液系統進入分析儀的分離系統，根據樣品中各組分在層析柱內固定相和流動相間分配或吸附等特性的差異，達到分離效果，由檢測器檢測各組分的保留時間和響應值（峰面積或峰高）后由樣品收集系統收集目標蛋白質。分析儀除了傳統的紫外檢測器外通常還配有 pH 檢測器、電導檢測器等多種檢測器實時控制流路中各項理化參數，以確保蛋白質分離的效果。

分析儀主要由進樣系統、輸液系統、檢測系統、分離系統、收集系統和數據處理系統組成。

蛋白純化儀校準計量特性確認為：

泵流量示值誤差、泵流量穩定性、泵梯度流量準確度、pH檢測示值誤差、pH 檢測重復性、電導檢測示值誤差、電導檢測重復性、電導檢測溫度示值誤差、紫外檢測器波長示值誤差、紫外檢測器波長重復性、收集器溫度示值誤差、收集器加樣示值誤差、收集器加樣重復性、整機定量重復性和整機定性重復性。

紫外檢測器波長示值誤差和重復性（蛋白純化儀校準）

將檢測器和數據處理系統連接好，通電預熱穩定后，用注射器將純水注入檢測池內進行沖洗后，充滿檢測池。待儀器穩定后，從檢測器入口注入紫外分光光度計用溶液標準物質（空白），待檢測器示數穩定后，在（200~350）nm 波長下選擇三個用戶常用的檢測點，將檢測器示數回零。然后，從檢測器入口注入紫外波長標準物質，待示值穩定后，調節檢測器波長進行測量。例如測試235nm 時，從 230nm 開始到 240nm，每 0.5 分鐘改變 1nm，記錄每個波長下的吸收值。有波長掃描功能的儀器可畫出紫外分光光度計用溶液標準物質光譜曲線。測得的最大或最小吸收值對應的波長即為特征波長實際測量值，重復測量3 次，3 次測量值的平均值與參考波長之差為波長示值誤差，3 次測量值中的最大值與最小值之差為波長重復性。按此方法依次測試各測試的波長示值誤差和重復性。

校準用的標準物質

1 pH 標準物質：pH 測量范圍（3～10），不確定度應小于等于 0.01（k=2）

2 電導率標準物質：相對不確定度應小于或等于 0.25%（k=2）。

3 紫外分光光度計溶液標準物質：參考波長為 235nm，257nm，313nm 和350nm。

公司背景介紹：

澤恒.華譜在計量校準、驗證與確認的優勢是專注做生物制藥質控服務，針對一些特殊的儀器都非常熟悉，核心團隊來源于制藥公司和儀器廠家，對儀器和GMP法規都很熟悉，比如：我們團隊專門研發了替代進口的熒光定量PCR儀校準裝置，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準的成本（遠低于同行）；我們開發了細胞計數儀的校準內部規程；開發了細胞復蘇儀的內部校準規程；開發了凝膠電泳掃描儀的校準規程；我們開發了溫度驗證所需要的超低溫和超高溫一體化無線探頭，降低用戶大量使用探頭時的成本，代替了進口；這些例子還有很多，因為我們都是生物出身，所以我們關注每一個生物用戶工藝要求，在生物制藥儀器設備上面專注，“與質量同行、做儀器設備質控"，為了讓生物制藥更安全而努力。

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